Нуклеин қышқылының синтезінің принциптері

Нуклеин қышқылының синтезі қатты фазалық сиал амидті триглицерид әдісі арқылы жүзеге асырылады, оның көмегімен ДНҚ-ның 3′ ұшы қатты фазалық субстратта иммобилизацияланады және қажетті ДНҚ фрагменті синтезделгенше нуклеотидтер 3′ – 5′ бағытында қосылады. .Бұл ДНҚ синтезінен ДНҚ полимеразаның қолданылуымен ерекшеленеді.

Бірінші негіздің 3′ ұшы синтез кезінде CPG-де иммобилизацияланады, келесі негіздің 5′-ОН ди-п-толилтритил DMT-мен, негіздегі амин тобы бензой қышқылымен және 3′-мен қорғалған. Содан кейін -OH аминфосфат қосылысымен белсендіріледі.1 негіздің 5 5′-ОН негізі және келесі негіздің 3′-ОН негізі фосфит триглицеридін түзеді, содан кейін ол йодпен фосфатты триглицеридке дейін тотығады, екінші негіздегі қорғаныш 5′-ОН жойылады. дихлорсірке қышқылын қосу келесі негізді қосу арқылы ДМ циклдары және синтезден кейін 5′-ОН бойынша қорғаныш әлсіз қышқылмен жойылады Фрагмент концентрлі аммоний гидроксиді бар қатты шайырдан ажыратылады, қорғаныш негізден жойылады. қыздыру кезінде концентрацияланған аммоний гидроксидімен аммоний гидроксиді жойылады, фрагмент вакуумда кептіріледі, ал нуклеин қышқылы сұйық хроматография немесе PAGE арқылы тазартылады.

Олиго синтезінің кезеңдері

Блоктан шығару

The5 ұшы DMT қорғау тобы TCA ерітіндісін қосу арқылы жойылады.

Белсендіру

Белсенді олигонуклеотидті мономердің аралық өнімін қалыптастыру үшін активаторды олигонуклеотидті мономермен араластыру.

Муфта

5-терминалды гидроксил тобы тұрақсыз фосфит триглицеридтік байланыс түзу үшін антигенеративтік конденсация реакциясында белсенді олигонуклеотид аралық өнімімен әрекеттеседі.

Қақпақ 

Тығыздау агентін қосу конденсация реакциясына қатыспайтын артық гидроксил топтарымен ацетилдеу жабу реакциясын орындайды.

Тотығу 

Құрамында суы бар йод ерітіндісін қосқанда тұрақты емес фосфиттік байланыстармен тотығу арқылы әрекеттеседі және тұрақты фосфор қышқылы триглицеридтік байланыстар түзеді.

Цианоэтилдің бөлінуі

Синтезден кейінгі нуклеин қышқылы өнімі, фосфат триглицеридтік байланыстан цианэтил тобын жою үшін DEA ерітіндісін қосу арқылы.

Бөлінген&Қорғаусыздану

Нуклеин қышқылының фрагменттері концентрлі аммоний гидроксиді ерітіндісін қосу арқылы қатты фаза тасымалдаушысынан бөлінеді, содан кейін негіздердің сутектік байланыстарынан қорғаныш топтарын алып тастау үшін қыздырылады.