ДНҚ синтезінің негізгі принципі

Химиялық ДНҚ синтезі қатты фазалық синтез стратегиясына және фосфорамидит химиясына негізделген.Биологиялық ДНҚ синтезінен айырмашылығы, химиялық ДНҚ синтезіндегі материал 1-суретте көрсетілгендей DMT (4, 4-диметокситритил) және фосфорамидитпен модификацияланған дезоксирибоксид болып табылады. ДНҚ синтезі қатты тіректе жүзеге асырылады (біз әртүрлі әдістерді ұсына аламыз)Олиго синтезінің бағанасы), яғни CPG (бақыланатын кеуекті әйнек) және PS (полистирол) және бүкіл синтез бір жерде орындалады.ДНҚ/РНҚ синтезаторы, біздің негізгі жабдығымыз болып табылатын, әртүрлі модельге ие, мысалы: HY бір арналы синтезатор, HY-12, HY-192 және т.б., синтез бағыты 3'-тен 5'-ке дейін, ал нуклеотид бір арқылы қатты тірекке енгізіледі. синтез циклі.Әдетте синтез циклі төрт қадамды қамтиды, қорғанысты жою, біріктіру, жабу және тотығу (2-сурет).Қорғаныссыздандыру қатты тіректегі DMT тобын немесе алдыңғы нуклеозидтегі 5' гидроксил тобын жою үшін орнатылған, қорғанысты жою реагенті ретінде дихлорометандағы 3% трихлорсірке қышқылы пайдаланылады.Содан кейін фосфорамидитпен модификацияланған дезоксирибоксид активатордың көмегімен гидроксил тобын экспозициялауға рұқсат етілді, яғни 5-этилтиотетразол немесе 4,5-дицианомидазол, фосфитетриэфирді (III) құрап, Қосылу қадамын жүзеге асырды.Қосылу қадамы кезінде реакцияға түспеген гидроксил тобын блоктау үшін, қалаусыз ақау тізбегінің пайда болуын азайту үшін жабу қадамы орындалады.Ақырында, тұрақсыз фосфитетриэфир (III) пиридин құрамындағы тотықтырғыш ретінде йодпен химиялық тұрақты фосфортриестерге (V) дейін тотығады.

Синтезделген ДНҚ қатты тіреуіштен аминолиз арқылы бөлінуі мүмкін, фосфортристердегі 2-цианэтилмен қорғалған топ және нуклеобазадағы амид бір уақытта ыдырайды, сөрелерде синтездеу тақталары мен синтез бағандары тікелей реакция камерасына орналастырылады. -ныңҚорғанысты жоюға арналған жабдық.Шикі ДНҚ сұраныс бойынша HPLC, электрофорез және OPC арқылы дайындалуы мүмкін, біз сізге сонымен бірге қамтамасыз ете аламыз.Тазарту жабдығыкейінгі өңдеу үшін.